06.02.2019

Исследование микроРНК в среде после культивирования бластоцист для определения репродуктивного потенциала эмбрионов.

Цель исследования

Проанализировать внеклеточные микроРНК в использованной среде для культивирования бластоцист и установить возможность их использования в качестве биомаркеров потенциала развития эмбрионов.

Дизайн

Проспективное когортное исследование.

Участники

Частные и академические клиники лечения бесплодия.

Материалы и методы

Бластоцисты без ВКМ и образцы среды от развивавшихся вместе с ними пяти бластоцист хорошего качества.

 Протокол очистки и анализа микроРНК проведен с помощью количественного ПЦР и валидирован на человеческих эмбриональных стволовых клетках, а также на пробах среды, оставшейся после культивирования человеческих бластоцист.

 Проанализирована принадлежность микроРНК к клеткам трофэктодермы и сравнены профайлы имплантировавшихся и неимплантировавшихся эуплоидных бластоцист.

Результаты

Образцы культуральной среды после культивирования эмбрионов на стадии дробления, морулы и бластоцисты были проанализированы на наличие микроРНК. Образцы использованной среды также были собраны после культивирования эуплоидных бластоцист с успешной последующей имплантацией (n=25) и отсутствием имплантации (n=28). Мы предположили, что эмбрионы человека секретируют в культуральную среду микроРНК, которая может быть использована в качестве биомаркера. Сравнительный анализ трофэктодермы и образцов среды показал, что 96,6% (57 из 59; 95CI, 88.3-99.6) микроРНК, обнаруженных в использованной культуральной среде, продуцированы клетками трофэктодермы. Анализ образцов культуральной среды, полученной от дробящихся эмбрионов и морул, был схож с анализом пустых образцов. Это подтверждает, что профилирование микроРНК применимо только для культуры бластоцист. Анализ микроРНК в образцах культуральной среды эуплоидных бластоцист с последующей успешной и неуспешной имплантацией выявил наличие двух типов микроРНК (miR-20a, miR-30c), которые имели повышенные концентрации и по различным данным могут принимать участие в 23 метаболических путях, связанных с имплантацией.

Заключение

МикроРНК, секретируемые бластоцистами человека, могут быть профилированы с высокой точностью и использованы в построении модели неинвазивной селекции эмбрионов.

Оригинал статьи